


Том 50, № 1 (2024)
Статьи
Новый подход к получению аналога КЭП-структуры с правильной ориентацией (Anti-Reverse Cap Analog, ARCA) 2mGpppG
Аннотация
Предложен новый подход к синтезу ARCA (Anti-Reverse Cap Analog) классической структуры – диметилированного динуклеотида гуанозина 2mGpppG. Традиционный подход к его получению состоит в конденсации активированного 5′-дифосфата 7,3′-О-диметилгуанозина c 5′-монофосфатом гуанозина. Мы предлагаем использовать 3′-О-метилгуанозин только для синтеза 5′-монофосфата диметилированного гуанозина, а в конденсацию вводить активированный 5′-дифосфат гуанозина. Определены условия фосфорилирования 3′-O-метилгуанозина, позволяющие избежать образования побочного 3′-О-метил-5′- дезокси-5′-хлоргуанозин-2′-фосфата. ARCA синтезирован с высоким выходом (89% на стадии конденсации). Разработанный нами вариант синтеза легко масштабируется и удобен для получения граммовых количеств ARCA.



Поверхностно-активные вещества как средства доставки репортерной генетической конструкции на основе суицидного гена биназы в опухолевые клетки
Аннотация
Среди современных генотерапевтических методов борьбы с онкологическими заболеваниями особой значимостью и перспективностью отличается суицидальная генотерапия, основанная на доставке в клетки-мишени цитотоксического агента. В качестве одного из таких агентов может рассматриваться ген рибонуклеазы Bacillus pumilus 7P – биназы, обладающей высоким противоопухолевым потенциалом и низкой иммуногенностью. Помимо выбора трансгена еще одним фактором, влияющим на эффективность генотерапии, является способ доставки нуклеиновой кислоты в клетки-мишени. Поверхностно-активные вещества (ПАВ) обладают высокой функциональной активностью и представляют собой перспективные средства доставки терапевтических нуклеиновых кислот. Цель данной работы – оценка возможности использования геминальных ПАВ как средств доставки генетической конструкции на основе гена цитотоксичной биназы в опухолевые клетки. Для подбора условий трансфекции была создана репортерная генетическая конструкция, несущая ген биназы, слитый с геном зеленого флуоресцентного белка TurboGFP. Опухолевые клетки аденокарциномы легких человека А549 трансфицировали с использованием коммерческого реагента Липофектамина 3000, эффективность трансфекции оценивала по интенсивности флуоресценции белка TurboGFP. Для устранения токсического действия биназы на клетки-реципиенты в состав генетической конструкции был введен ген ингибитора РНКазы – барстара. Методами динамического светорассеяния и флуоресцентной спектроскопии была показана высокая комплексообразующая способность геминальных ПАВ в отношении репортерной системы. Для ПАВ 16-6-16ОН обнаружена наибольшая трансфицирующая активность при низком уровне цитотоксичности. Таким образом, доказана возможность использования геминальных ПАВ для доставки терапевтических нуклеиновых кислот в опухолевые клетки.



Участие транскрипционного фактора CREB1 в регуляции работы гена Mdh2, кодирующего малатдегидрогеназу, в печени крыс при аллоксановом диабете
Аннотация
Цель данного исследования – изучение роли транскрипционного фактора CREB1 в регуляции экспрессии гена, кодирующего митохондриальную форму малатдегидрогеназы (MDH, КФ 1.1.1.37), в печени крыс при экспериментальном аллоксановом диабете. Показано увеличение скорости работы NAD-зависимой малатдегидрогеназы в клетках печени крыс при развитии экспериментального диабета, связанное с активацией работы кодирующих данный фермент генов Mdh1 и Mdh2. Анализ промоторов этих генов показал, что только в составе гена Mdh2 присутствует специфический сайт связывания с транскрипционным фактором CREB1. Выяснено, что в печени крыс с диабетом наблюдается увеличение скорости экспрессии гена, кодирующего данный транскрипционный фактор, что коррелирует с транскрипцией гена Mdh2. Таким образом, полученные нами данные подтверждают возможность положительной регуляции скорости работы гена Mdh2, кодирующего митохондриальную форму малатдегидрогеназы, транскрипционным фактором CREB1.



Выделение, физико-химические характеристики и определение острой токсичности водорастворимых полисахаридов из базидиального гриба Ganoderma lucidum
Аннотация
Из базидиального сырья Ganoderma lucidum выделены разветвленные полисахариды. Установлено, что выделенные фракции содержат разветвленные полисахариды в виде комплексов с меланином. После очистки полисахаридов методом ионообменной хроматографии из базидиального сырья получили две фракции: нейтральные полисахариды GW-1 с выходом 25.71% и анионные полисахариды GW-2 с выходом 5.26%. Изучены физико-химические свойства полученных образцов методами ИК- и УФ-спектроскопии. Установлена степень чистоты полученных фракций разветвленных полисахаридов. Методами газовой хроматографии, одномерной (13C-ЯМР, 1H-ЯМР) и двумерной (COSY, TOCSY, HSQC, HMBC, NOESY) ЯMР-спектроскопии установлены состав и молекулярная структура полученных образцов полисахаридов. Выделенные и очищенные полисахариды представляют собой разветвленные глюканы с 1,4,6- и 1,3,6-связями между глюкопиранозными звеньями. Фармакотоксикологические исследования проводили на белых беспородных мышах. Установлено, что полученные полисахариды относятся к V классу (практически нетоксичные соединения, LD50 ≥ 2000 мг/кг).
Выделенные полисахариды (GW) – перспективные биологически активные компоненты, на основе которых возможно создание лекарственных средств, обладающих гепатопротекторной и противоопухолевой активностью.



Синтез стероидных трейсеров методом оксимного лигирования и их использование в поляризационном флуоресцентном иммуноанализе
Аннотация
Предложен метод синтеза конъюгатов ряда кетостероидов с 6-карбоксифлуоресцеином с использованием короткого бифункционального реагента аминооксипропиламина. Стереоизомеры, образующиеся при получении оксимов стероидов, были разделены с помощью препаративной ТСХ и протестированы в поляризационном флуоресцентном иммуноанализе (FPIA) с применением моноклональных антител. Изучены кинетические параметры связывания полученных флуоресцентных производных с моноклональными антителами к прогестерону. Таким образом, разработан эффективный и универсальный подход к синтезу флуоресцентных конъюгатов для иммуноанализа с оптимальной длиной линкера, который улучшает их аналитические характеристики и упрощает их получение. Продемонстрирована перспективность полученных соединений для практического применения в клинической диагностике и при анализе объектов окружающей среды.



ПИСЬМА РЕДАКТОРУ
Аминокумараноны как хемилюминесцентные индикаторы активности уреазы и перекиси водорода
Аннотация
Синтезирован ряд 3-аминокумаранонов. Установлено, что они проявляют яркую хемилюминесценцию при различных условиях. Показано, что введение электронно-донорных групп в кумараноновый фрагмент и увеличение сопряженной π-системы кумаранонов может сместить положение максимумов люминесценции на 30–40 нм в длинноволновую область. Показано, что некоторые 3-аминокумараноны могут быть использованы для определения активности уреазы и перекиси водорода.



Флуорогенные красители белка NanoLuc на основе арилиден-имидазолонов
Аннотация
Синтезирован ряд орто-замещенных арилиден-имидазолонов и их стирольных производных. Установлено, что такие соединения можно применять в качестве флуорогенных лигандов для белка NanoLuc. В паре с этим белком они могут быть использованы для генетически-кодируемого мечения живых клеток во флуоресцентной микроскопии, что было показано путем окрашивания клеток HEK293.



2,5-Диметоксибензилиденроданин и его ациклические аналоги как селективные флуорогенные красители липидных капель живых клеток
Аннотация
Синтезирована серия арилиденроданинов и их ациклических аналогов, изучены флуоресцентные свойства полученных соединений. Показано, что производные, содержащие 2,5-диметоксибензилиденовый фрагмент или аналогичные группы, характеризуются заметным варьированием квантового выхода флуоресценции в зависимости от свойств среды. Установлено, что два полученных соединения – диметоксибензилиденроданин и диметоксибензилиденмалононитрил – могут выступать в роли селективных флуорогенных красителей для липидных капель (адипосом) живых клеток для мечения в условиях флуоресцентной микроскопии.


