METHODOLOGY OF SAMPLING OF BIOLOGICAL MATERIALS FOR MICROSCOPIC METHOD OF RESEARCH IN THE OBSTETRIC-GYNECOLOGICAL PRACTICE

Full Text

Определение. Микроскопический метод исследования - это способ изучения различных объектов с помощью микроскопа. В биологии и медицине эти методы позволяют изучать строение микроскопических объектов, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности глаза человека. Основу данного метода составляет световая и электронная микроскопия. В клинической и научной деятельности также используется фазово-контрастная, интерференционная, люминесцентная, поляризационная, стереоскопическая, ультрафиолетовая и инфракрасная микроскопия. В основе этих методов лежат различные свойства света. При электронной микроскопии изображение объектов исследования возникает за счет направленного потока электронов. Для световой микроскопии и основанных на ней других микроскопических методов исследования определяющее значение, помимо разрешающей способности микроскопа, имеют характер и направленность светового луча, а также особенности изучаемого объекта, который может быть прозрачным и непрозрачным. В зависимости от свойств объекта изменяются физические свойства света - его цвет и яркость, связанные с длиной и амплитудой волны, фаза, плоскость и направление распространения волны. На использовании этих свойств света и строятся различные микросопические методы диагностики. Для световой микроскопии биологические объекты обычно окрашивают с целью выявления тех или иных их свойств. При этом ткани должны быть фиксированы, так как окраска выявляет определенные структуры только убитых клеток. В живой клетке краситель обособляется в цитоплазме в виде вакуоли и не прокрашивает ее структуры. Однако в световом микроскопе можно изучать и живые биологические объекты с помощью метода витальной микроскопии. В этом случае применяют темнопольный конденсор, который встраивают в микроскоп. В акушерско-гинекологической практике наиболее часто используются следующие разновидности световой микроскопии. Метод светлого поля в проходящем свете используют для микроскопии прозрачных и неоднородных по структуре объектов. Освещение направлено на исследуемый объект снизу, световые лучи проходят сквозь прозрачную среду и поглощаются в местах большей плотности. Чтобы изображение было более контрастным, материал для исследования предварительно окрашивают. Метод косого освещения используют для исследования прозрачных объектов. Сам метод подразумевает исследование объекта в свете, падающем под большим углом. При этом можно выявить особенности поверхности объекта (рельефность, контуры). Метод темного поля - освещение направлено на исследуемый прозрачный объект таким образом, что проходящие через него лучи собираются вместе и не попадают в объектив, благодаря чему получается светлое изображение на темном фоне. Метод висячей капли - с помощью данного метода можно исследовать подвижность живых микроорганизмов. Небольшую каплю биологического материала, содержащую микробную взвесь, наносят на середину покровного стекла. Предметное стекло с углублением (лункой), края которого смазаны вазелином, осторожно накладывают на покровное стекло так, чтобы капля исследуемой жидкости оказалась в центре углубления, плотно прижимают к стеклу и быстро переворачивают вверх. Для исследования препарата используют иммерсионный объектив, который погружают в иммерсионное масло на покровном стекле. Показания: скрининговая оценка степени «чистоты» влагалища при беременности и при плановых гинекологических осмотрах; лабораторное подтвержение вульвовагинальной инфекции; планируемые манипуляции на матке, шейке матки, влагалище. Цель: определение доминирующих морфотипов влагалищной микрофлоры; выявление маркеров бактериального вагиноза («ключевых» клеток), трихомониаза, гонореи; подсчет количества лейкоцитов, эпителиальных клеток. Информативность метода. В повседневной клинической практике микроскопическое исследование, как правило, используют для ускоренной ориентировочной диагностики. Основные задачи микроскопии: выявление возбудителя в клиническом материале, ориентировочная идентификация на основе определения характерных морфологических и тинкториальных признаков микроорганизмов, а также изучение окрашенных мазков из колоний чистых культур. При некоторых инфекционных болезнях, для возбудителей которых характерна специфичность морфологии (протозойные болезни, гельминтозы, грибковые заболевания, спирохетозы), микроскопическое исследование - основной или один из основных методов диагностики. Наибольшую диагностическую ценность микроскопического метода исследования в акушерско-гинекологической практике представляет выявление лейкоцитарной реакции (подстчет количества лейкоцитов), что невозможно произвести никаким другим методом диагностики, кроме микроскопии. Подготовка к исследованию. Оптимальным временем забора является первая фаза менструального цикла. При наличии менструальных выделений исследование может оказаться неинформативным. При беременности взятие биологического материала для микроскопии производится в соответствии с действующими инструкциями Минздрава РФ, регламентирующими дородовое наблюдение беременных. До взятия образцов биологического материала необходимо подписать предметное стекло, разделить его на три равные части, указав в каждой локус: V, C, U (влагалище, цервикальный канал и уретра); для этой цели используйте специальный тонкий маркер для письма по стеклу. Техника проведения. Шейка матки обнажается в зеркалах (рис. 1). Производится удаление слизи и влагалищных выделений с шейки матки стерильным марлевым тампоном (рис. 2); производят визуальную оценку влагалищной порции шейки матки. Хлопковым тампоном (рис. 3), мягкой щеточкой - урогенитальным универсальным зондом (рис. 4) или ложкой Фолькмана (рис. 5) производится взятие свободного отделяемого влагалища из заднего, латерального и переднего сводов (рис. 6) с последующим нанесением его на предметное стекло. Образец биологического материала необходимо нанести на сухое обезжиренное стекло ровным слоем, создав окружность диаметром около 1-1,5 см. Для получения отделяемого из цервикального канала, как указывалось выше, стерильным марлевым тампоном удаляют выделения и слизь с шейки матки (см. рис. 2), мягкую щетку или марлевый тампон вводят в цервикальный канал на глубину до 1-2 см (рис. 7). Материал затем наносится на предметное стекло аналогичным способом (рис. 8). Свободное отделяемое из уретры забирается аналогично вышеописанной методике с той разницей, что перед взятием рекомендуется произвести массаж уретры - производят 2-3 массирующих движения к наружному отверстию уретры по уретральному килю влагалища (рис. 9-11). Перед массажем уретры необходимо протереть наружное отверстие уретры стерильным марлевым тампоном. Зонд или тампон вводят на глубину 1,5-2 см и легким поскабливанием передней и боковых стенок уретры получают отделяемое (рис. 12). Материал фиксируют на воздухе в течение 5-10 мин. Взятие материала у девочек производится со слизистой оболочки преддверия влагалища, иногда из заднего свода влагалища путем введения зонда через гименальные кольца. Маркировка материала. На предметном стекле указывают фамилию пациентки, дату взятия отделяемого, локусы: V, C, U (влагалище, цервикальный канал и уретра). После фиксации материала на воздухе в течение 3-5 мин предметное стекло убирают в пенал либо герметично завертывают в бумагу (рис. 13). Последним этапом является заполнение бланка-направления, в котором необходимо заполнить все имеющие графы.

About the authors

Vitaliy A. Kaptil’nyy

I.M. Sechenov First Moscow State Medical University

Email: 1mgmu@mail.ru
MD, PhD, leading researcher of Research Department of Women’s Health of Research Center, Assistant of the Department of Obstetrics and Gynecology No1 of the I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Moscow, 119991, Russian Federation Moscow, 119991, Russian Federation

References

Supplementary files