Features of lipid peroxidation and antioxidant system status in women after spontaneous miscarriage

Full Text

ОБОСНОВАНИЕ

Невынашивание беременности является одной из главных составляющих репродуктивных потерь, так как от 15 до 25% беременностей прерываются самопроизвольно и 80% из них — в первом триместре гестации [1, 2]. В связи с тем, что невынашивание беременности может стать привычным, важна своевременная профилактика данного осложнения, которое возникает вследствие изменений функции эндокринной, иммунной, гемостатической и других систем [3–5]. Роль окислительного стресса в развитии гинекологических заболеваний и протекании беременности является предметом текущих исследований. Окислительный стресс характеризуется дисбалансом между системами, продуцирующими активные формы кислорода, и антиоксидантными механизмами [6, 7].

Нарушение метаболизма и энергетического баланса — следствие окислительного стресса, вызывающего повреждение клеток и патологические изменения в тканях и органах. Прооксиданты инициируют окисление нуклеиновых кислот, перекисное окисление липидов, а также повреждение клеточных мембран и белков. Дефицит антиоксидантной защиты и окислительный стресс являются ключевыми патогенетическими механизмами многих заболеваний, в том числе акушерско-гинекологического профиля [8, 9]. Данные ряда исследований указывают на усиление процессов свободно-радикального окисления липидов и ослабление антиоксидантной системы крови при воспалительных заболеваниях женских репродуктивных органов [10–14].

Проблема разработки эффективных методов лечения самопроизвольного прерывания беременности остаётся актуальной. Несмотря на многочисленные исследования в этой области [15–17], поиск адекватных противовоспалительных стратегий продолжается. Альтернативой медикаментозной терапии, которая может вызывать побочные реакции (например, аллергию), являются методы физиотерапии, использующие воздействие магнитных полей, лазеров, озона и других физических факторов. Эти методы способствуют снижению воспалительной активности и положительно влияют на иммунную и антиоксидантную системы, а также на гемостаз [18, 19].

Цель исследования. Изучение состояния перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы защиты у пациенток после самопроизвольного выкидыша в первом триместре беременности при проведении профилактической противовоспалительной терапии.

МЕТОДЫ

Исследование проведено в период с января по март 2025 года. После получения результатов была осуществлена статистическая обработка данных. В исследовании принимали участие 146 пациенток фертильного возраста (26,8±2,8 года) после самопроизвольного выкидыша, которым была проведена вакуум-аспирация содержимого полости матки из-за обильных кровяных выделений. Обследованные были разделены на три группы в зависимости от проводимого метода профилактики воспалительных осложнений. К 1-й группе отнесены 48 женщин, которым назначали комплексную профилактику (антибактериальную и физиотерапию); 2-я группа включала 45 пациенток, которым в связи с ранее имевшимися аллергическими реакциями на антибиотики назначали только физиотерапию; в 3-ю группу вошли 53 женщины, получавшие только антибактериальную терапию, так как от физиотерапии они отказались. В качестве антибактериальной терапии у пациенток без хламидийной инфекции использовали метронидазол 1,0 г перорально в день прерывания беременности. Пациенткам, не обследованным на хламидийную инфекцию, назначали азитромицин 1,0 г в сочетании с метронидазолом 1,0 г перорально в день прерывания беременности. Антибактериальную терапию назначали с учётом клинических рекомендаций «Выкидыш (самопроизвольный аборт)» [20].

Первое обследование пациенток было на вторые сутки после самопроизвольного выкидыша и повторно — через 2 недели. У всех пациенток первое и повторное обследования проводили с помощью общеклинических, лабораторных и инструментальных методов. Помимо общепринятых методов лабораторного обследования, для углублённого изучения степени выраженности воспалительной реакции, вызванной прерыванием беременности, оценивали перекисное окисление липидов и антиоксидантную активность в сыворотке крови. Оценивали показатели перекисного окисления липидов (малонового диальдегида и диеновых конъюгатов) и активность ферментов антиоксидантной системы (каталаза и супероксиддисмутаза). Концентрацию малонового диальдегида (мкмоль/л) определяли флуориметрическим методом по методике В.Б. Гаврилова и соавт. (1987). Для определения содержания диеновых конъюгатов использовали спектрофотометр СФ-26; измерения проводили в метанол-гексановой липидной фракции (5:1) при длине волны 233 нм, результаты представляли в единицах оптической плотности на миллиграмм общих липидов. Активность каталазы определяли спектрофотометрически по уменьшению концентрации перекиси водорода (ед/г Нв·мин), а активность супероксиддисмутазы — с помощью нитросинего тетразолия (ед/г Нв·мин). Кровь забирали из локтевой вены натощак в соответствии со стандартными протоколами.

Физиотерапия включала магнито-ИК-свето-лазерное воздействие на область малого таза. Использовали полупроводниковый лазерный аппарат отечественного производства «Милта-Ф», работающий в непрерывном и импульсном режимах, с излучением в ближнем инфракрасном диапазоне спектра. Магнито-ИК-свето-лазерную терапию начинали на вторые сутки после аспирации остатков плодного яйца, используя интравагинальное или трансабдоминальное воздействие на область проекции матки и придатков в течение 6–8 мин, курс 6–8 сеансов [21].

Эффективность лечения оценивали повторно через две недели после самопроизвольного аборта (второй визит) с использованием клинических, лабораторных и инструментальных методов. Статистическую обработку данных (среднее значение, стандартное отклонение, стандартная ошибка среднего) проводили с помощью программы Epi Info версии 5.01b, для сравнения групп использовали t-критерий Стьюдента.

Проведение исследования одобрено локальным этическим комитетом ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России (протокол № 247 от 16.12.2024). Все пациенты, данные которых включены в исследование, при поступлении в стационар подписывали информированное добровольное согласие на использование результатов обследования и лечения в научных целях.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Распределение женщин в зависимости от срока прерывания беременности достоверно не различалось по группам и составляло до 6 недель — 40 (27,4%) пациенток; 6–9 недель — 106 (72,6%). Группы не имели статистически значимых различий по клинико-анамнестическим характеристикам, состоянию гинекологического и соматического здоровья.

Все пациентки были обследованы при беременности, им проводили микробиологические исследования отделяемого из цервикального канала и соскоба со стенки влагалища. Результаты бактериоскопического исследования представлены на рис. 1.

 

Рис. 1. Результаты бактериоскопического исследования отделяемого половых путей у обследованных пациенток.

 

Как видно из данных рис. 1, в результате бактериоскопического исследования отделяемого половых путей статистически значимых различий между группами не было. Бациллярная флора обнаружена у 83 (56,8%) из 146 обследованных, причём в мазках присутствовали не только лактобактерии, но и другие виды палочек, включая E. coli. Повышенное количество лейкоцитов (более 30 в поле зрения) при осмотре мазков выявлено у 44 (30,1%) пациенток. Кокковая флора определена у 5 (10,4%), у 6 (13,3%) и у 6 (11,3%) пациенток 1-й, 2-й и 3-й групп соответственно (р >0,05). Мицелий и споры гриба Candida обнаружены у 2 (4,1%) женщин 1-й группы, у 2 (4,4%) — 2-й, у 3 (5,7%) — 3-й (р >0,05). Ключевые клетки обнаружены у 2 (4,1%), у 3 (6,7%) и у 2 (3,8%) пациенток 1-й, 2-й и 3-й групп соответственно (р >0,05).

Патогенная флора (Neisseria gonorrhea, Chlamidya trahomatis, Trichomonas vaginalis, Mycoplasma genitalium) при бактериоскопическом, бактериологическом и ПЦР-исследовании не обнаружена. При бактериологическом исследовании в биоматериале определялись условно-патогенные микроорганизмы (Enterobacteriaceae spp, Streptococcus spp, Staphylococcus spp., E. coli) у 15 (31,2%) пациенток 1-й группы, у 13 (28,9%) — 2-й и у 14 (26,4%) — 3-й (р >0,05).

Для оценки воспалительной реакции и степени повреждения тканей определяли уровни перекисного окисления липидов (малоновый диальдегид и диеновые конъюгаты) и активность антиоксидантных ферментов (супероксиддисмутазы и каталазы) в сыворотке крови. Исследование проводили дважды: на вторые сутки после самопроизвольного аборта и через две недели. В качестве контрольной группы выступали 30 здоровых женщин репродуктивного возраста (31,8±1,5 года), у которых были определены аналогичные показатели. Полученные результаты представлены в табл. 1.

 

Таблица 1. Показатели системы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты у обследованных пациенток до начала противовоспалительного лечения

Показатель	Здоровые женщины (n=30)	Пациентки после самопроизвольного выкидыша (n=146)
Малоновый альдегид, мкмоль/л	0,92±0,03	1,24±0,08*
Диеновые коньюгаты, усл. ед.	0,95±0,07	1,18±0,09*
Каталаза, усл. ед.	0,24±0,08	0,17±0,50*
Супероксиддисмутаза, усл. ед.	1,85±0,04	1,48±0,06*

Примечание. * р <0,05 — различия показателей пациенток после выкидыша в сравнении со здоровыми женщинами.

 

Установлено, что у женщин, перенёсших самопроизвольный выкидыш, происходит накопление субстратов окисления процесса липопероксидации — малонового диальдегида (в 1,3 раза) и диеновых коньюгатов (в 1,2 раза); р <0,05, по сравнению с практически здоровыми женщинами (см. табл. 1). При рассмотрении компонентов антиоксидантной системы у женщин после самопроизвольного выкидыша в первом триместре беременности, по сравнению со здоровыми женщинами, обнаружено снижение уровней каталазы (в 1,4 раза) и супероксиддисмутазы (в 1,25 раза), эти изменения были статистически значимыми (р <0,05).

Далее мы сравнили результаты обследования пациенток после самопроизвольного выкидыша в зависимости от проведённого варианта противовоспалительной терапии (рис. 2–5).

 

Рис. 2. Уровни малонового диальдегида (мкмоль/л) у обследованных пациенток после cамопроизвольного выкидыша.

 

Рис. 3. Уровни диеновых коньюгатов (усл. ед.) у обследованных пациенток после самопроизвольного выкидыша.

 

Рис. 4. Уровни супероксиддисмутазы (усл. ед.) в сыворотке крови у обследованных пациенток после самопроизвольного выкидыша.

 

Рис. 5. Уровни каталазы (усл. ед.) в сыворотке крови у обследованных пациенток после самопроизвольного выкидыша.

 

Рис. 2 демонстрирует статистически значимое снижение уровня малонового диальдегида в сыворотке крови у всех пациенток после лечения (p <0,05), приближаясь к контрольным значениям. В 1-й группе снижение составило 20,5% (с 1,22±0,2 до 0,97±0,1 мкмоль/л), во 2-й — 21,9% (с 1,23±0,1 до 0,96±0,02 мкмоль/л), в 3-й — 20,97% (с 1,24±0,1 до 0,98±0,05 мкмоль/л). Статистически значимых различий в эффективности снижения уровня малонового диальдегида между группами обнаружено не было.

Проведённые исследования показали, что уровень диеновых коньюгатов (см. рис. 3), который был повышен в первые сутки после выкидыша, по сравнению с таковым у здоровых женщин, на фоне профилактического противовоспалительного лечения статистически значимо снижался ко второму визиту у всех обследованных (р <0,05). Так, у пациенток 1-й группы, получивших комплексную терапию, уровень диеновых коньюгатов снизился на 20,2% (с 1,19±0,03 до 0,95±0,13 усл. ед.), во 2-й группе — на 17,9% (с 1,17±0,03 до 0,96±0,13 усл. ед.), в 3-й группе — на 16,9% (с 1,18±0,01 до 0,98±0,13 усл. ед.). Анализ показал, что у пациенток, получавших комплексную терапию, снижение уровня диеновых коньюгатов было более выраженным, по сравнению с пациентками, получавшими только физиотерапию или только антибактериальную терапию, однако статистически значимых различий между тремя группами обследованных не выявлено.

Заслуживают внимания также данные уровней супероксиддисмутазы и каталазы, представленные на рис. 4 и 5. Эти показатели имели статистически значимые изменения (р <0,05) ко второму визиту у всех пациенток, по сравнению с состоянием при первом визите.

Представленные данные на рис. 4 демонстрируют статистически значимое (р <0,05) увеличение уровня супероксиддисмутазы у пациенток всех обследованных групп, по сравнению с первым визитом, причём более выраженным увеличение уровня фермента было в группе пациенток, получавших комплексную терапию: уровни супероксиддисмутазы увеличились на 21,1% (с 1,49±0,04 до 1,89±0,1 усл. ед.). Тогда как во 2-й группе увеличение супероксиддисмутазы составило 18,7% (с 1,48±0,04 до 1,82±0,05 усл. ед.), а в 3-й группе — 19,7% (с 1,47±0,2 до 1,83±0,3 усл. ед.).

Результаты, представленные на рис. 5, демонстрируют изменения уровня каталазы, маркера антиоксидантной защиты, после проведённого лечения. У всех пациенток наблюдалось статистически значимое увеличение активности каталазы (p <0,05), что свидетельствует о положительном влиянии терапии на антиоксидантный статус. Однако степень повышения активности каталазы существенно различалась между группами. В 1-й группе (комбинированная терапия: антибиотики и физиотерапия) наблюдалось наиболее выраженное увеличение активности каталазы — на 70,6% (с 0,17±0,1 до 0,29±0,1 усл. ед.). В группах, получавших только физиотерапию (2-я) и только антибактериальную терапию (3-я), рост активности каталазы был значительно меньше: 31,2% (с 0,16±0,1 до 0,21±0,2 усл. ед.) и 29,4% (с 0,17±0,1 до 0,22±0,3 усл. ед.) соответственно. Различия в приросте активности каталазы между 1-й группой и двумя другими группами статистически значимы (p <0,05).

ОБСУЖДЕНИЕ

Многочисленные исследования указывают на системный характер компенсаторных реакций, включающих повышение активности каталазы для снижения уровня активных форм кислорода при воспалении [10–12]. Таким образом, снижение активности каталазы в крови пациенток может сигнализировать о нарушении регуляции выработки активных форм кислорода и истощении адаптационных резервов организма. Сочетание повышенного уровня малонового диальдегида и сниженной активности каталазы рассматривается в ряде работ как неблагоприятный прогностический фактор при угрозе преждевременных родов [16, 17, 22].

В научной литературе широко представлены данные о тесной связи между хроническим воспалением и усилением перекисного окисления липидов. При различных хронических воспалительных заболеваниях, независимо от стадии процесса (ремиссия или обострение), наблюдается значительное повышение активности перекисного окисления липидов. Это приводит к накоплению в организме малонового диальдегида, конечного продукта перекисного окисления липидов, и одновременному снижению эффективности антиоксидантной защиты [13, 14, 16]. Такая взаимосвязь подтверждается и в отношении хронического рецидивирующего неспецифического сальпингоофорита, где активация перекисного окисления липидов в сыворотке крови тесно коррелирует с выраженностью воспалительного процесса и симптомами интоксикации. Более того, исследования показывают прямую зависимость: чем интенсивнее протекают процессы пероксидации липидов, тем выше концентрация промежуточных продуктов перекисного окисления липидов и тем сильнее выражено снижение активности антиоксидантных ферментов [12, 13].

Результаты нашего исследования демонстрируют аналогичные изменения у пациенток, перенёсших самопроизвольный выкидыш. Мы наблюдали усиление процессов перекисного окисления липидов, что подтверждается повышенным содержанием малонового диальдегида и диеновых конъюгатов [22]. Одновременно с этим было зафиксировано снижение активности ключевых ферментов антиоксидантной системы — каталазы и супероксиддисмутазы. Полученные данные позволяют предположить, что нарушения в системе свободно-радикального окисления липидов и дисбаланс между процессами образования активных форм кислорода и антиоксидантной защитой могут выступать в качестве важных предикторов развития самопроизвольного выкидыша. Дальнейшие исследования необходимы для более глубокого понимания роли окислительного стресса в патогенезе этого осложнения беременности и для разработки эффективных профилактических и лечебных стратегий.

В 1-й группе пациенток, получавших комплексную профилактическую терапию (антибактериальная терапия и физиотерапия), воспалительные осложнения не были зафиксированы. Во 2-й группе (только физиотерапия) и 3-й (только антибактериальная терапия) группах обострение хронического сальпингоофарита диагностировано соответственно у 2 (4,4%) и 3 (5,6%) пациенток (р >0,05). Несмотря на предположение о недостаточной эффективности физиотерапии без антибактериальной терапии и с учётом отсутствия у части пациенток подтверждённой патогенной микрофлоры и наличия аллергических реакций на антибиотики в анамнезе, во 2-й группе было принято решение ограничиться магнито-ИК-свето-лазерной терапией. Данный метод основан на синергическом действии постоянного магнитного поля, низкоинтенсивного импульсного лазерного и непрерывного светодиодного излучения инфракрасного диапазона длин волн, что, согласно литературным данным, обеспечивает более выраженный терапевтический эффект по сравнению с монотерапией каждым из этих факторов [21].

Анализ результатов лечения показал, что из 45 пациенток, получавших физиотерапию (2-я группа), воспалительный процесс развился лишь у 2 (4,4%), что свидетельствует о высокой эффективности магнито-ИК-светолазерной терапии. Данный показатель существенно ниже, чем в 3-й группе (3 из 53 пациенток; 5,6%), где применялась только антибактериальная терапия. Таким образом, частота воспалительных осложнений во 2-й и 3-й группах оказалась сопоставима. Это указывает на недостаточную эффективность монотерапии антибиотиками в профилактике воспалительных осложнений после самопроизвольного выкидыша. У двух пациенток 2-й группы с развившимся воспалительным процессом успешно проведена антибактериальная терапия с применением антигистаминных препаратов для предотвращения аллергических реакций. Аналогично у трёх пациенток 3-й группы, несмотря на начальную антибактериальную терапию азитромицином и метронидазолом, потребовалось назначение цефалоспоринов третьего поколения в течение семи дней для купирования воспалительного процесса.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

У пациенток после перенесённого выкидыша отмечаются признаки оксидативного стресса и нарушения состояния антиоксидантной системы. Нормализация состояния антиоксидантной системы происходит быстрее на фоне комплексной терапии, включающей антибактериальные препараты и магнито-ИК-свето-лазерную терапию, которая значимо снижает частоту воспалительных осложнений. Проведённые исследования продемонстрировали хороший результат применения магнито-ИК-свето-лазерной терапии в сочетании с однократным назначением антибактериальных средств пациенткам после самопроизвольного выкидыша в первом триместре беременности для профилактики воспалительных осложнений, что позволяет рекомендовать данную методику для широкого клинического применения.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Вклад авторов. Л.А. Озолиня — определение концепции, работа с данными, пересмотр и редактирование рукописи; И.В. Бахарева — определение концепции, разработка методологии, пересмотр и редактирование рукописи; А.В. Оверко — работа с данными, анализ данных, написание черновика рукописи; Н.И. Насырова — проведение исследования, обеспечение исследования, пересмотр и редактирование рукописи; М.З. Аргун — проведение исследования, работа с данными, пересмотр и редактирование рукописи. Все авторы одобрили рукопись (версию для публикации), а также согласились нести ответственность за все аспекты работы, гарантируя надлежащее рассмотрение и решение вопросов, связанных с точностью и добросовестностью любой её части.

Этическая экспертиза. Проведение исследования одобрено локальным этическим комитетом ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России (протокол № 247 от 16.12.2024). Все участники исследования подписали форму информированного добровольного согласия до включения в исследование.

Источники финансирования. Отсутствуют.

Раскрытие интересов. Авторы заявляют об отсутствии отношений, деятельности и интересов за последние три года, связанных с третьими лицами (коммерческими и некоммерческими), интересы которых могут быть затронуты содержанием статьи.

Оригинальность. При создании настоящей работы авторы не использовали ранее опубликованные сведения (текст, иллюстрации, данные).

Доступ к данным. Доступ к данным, полученным в настоящем исследовании, закрыт.

Генеративный искусственный интеллект. При создании настоящей статьи технологии генеративного искусственного интеллекта не использовали.

Рассмотрение и рецензирование. Настоящая работа подана в журнал в инициативном порядке и рассмотрена по обычной процедуре. В рецензировании участвовали два рецензента, член редакционной коллегии и главный редактор издания.

ADDITIONAL INFORMATION

Author contributions: L.A. Ozolinya: conceptualization, data curation, writing—review & editing; I.V. Bakhareva: conceptualization, methodology, writing—review & editing; A.V. Overko: data curation, formal analysis, writing—original draft; N.I. Nasyrova: investigation, resources, writing—review & editing; M.Z. Argun: investigation, data curation, writing—review & editing. All the authors approved the version of the manuscript to be published and agreed to be accountable for all aspects of the work, ensuring that questions related to the accuracy or integrity of any part of the work are appropriately investigated and resolved.

Ethics approval: The study was approved by the Local Ethics Committee of the Federal State Autonomous Educational Institution of Higher Education Pirogov Russian National Research Medical University, Ministry of Health of the Russian Federation (Protocol No. 247, December 16, 2024). All participants provided written informed consent prior to enrollment in the study.

Funding sources: No funding.

Disclosure of interests: The authors have no relationships, activities, or interests for the last three years related to for-profit or not-for-profit third parties whose interests may be affected by the content of the article.

Statement of originality: No previously published material (text, images, or data) was used in this work.

Data availability statement: Access to the data obtained in this study is restricted.

Generative AI: No generative artificial intelligence technologies were used to prepare this article.

Provenance and peer-review: This paper was submitted unsolicited and reviewed following the standard procedure. The peer review process involved two reviewers, a member of the editorial board, and the in-house scientific editor.

About the authors

Lyudmila A. Ozolinya

Pirogov Russian National Research Medical University

Email: ozolinya@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-2353-123X
SPIN-code: 9407-9014

MD, Dr. Sci. (Medicine)

Russian Federation, 1 Ostrovityanov st, Moscow, 117513

Irina V. Bakhareva

Pirogov Russian National Research Medical University

Email: iribakhareva@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-3078-0744
SPIN-code: 3411-1570

MD, Dr. Sci. (Medicine)

Russian Federation, 1 Ostrovityanov st, Moscow, 117513

Alexey V. Overko

Pirogov Russian National Research Medical University

Author for correspondence.
Email: leha.overko@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-4629-9074
SPIN-code: 5519-2836
Russian Federation, 1 Ostrovityanov st, Moscow, 117513

Nailya I. Nasyrova

Central Clinical Hospital of Civil Aviation

Email: ni_nasyrova@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-0657-7655
SPIN-code: 9016-5566

MD, Cand. Sci. (Medicine)

Russian Federation, Moscow

Madina Z. Argun

Central Clinical Hospital of Civil Aviation

Email: www2104@list.ru
ORCID iD: 0000-0003-4841-2496
SPIN-code: 5475-1763

MD, Cand. Sci. (Medicine)

Russian Federation, Moscow

References

Supplementary files