Features of the state of lipid peroxidation and antioxidant system in women after spontaneous miscarriage

Full Text

Введение. Невынашивание беременности является одной из главных составляющих репродуктивных потерь, так как от 15 до 25% беременностей прерываются самопроизвольно и 80% из них – в первом триместре гестации [1, 2]. В связи с тем, что невынашивание беременности может стать привычным, важна своевременная профилактика данного осложнения, которое возникает вследствие изменений функции эндокринной, иммунной, гемостатической и других систем [3-5]. Роль окислительного стресса (ОС) в развитии гинекологических заболеваний и протекании беременности является предметом текущих исследований. ОС характеризуется дисбалансом между системами, продуцирующими активные формы кислорода, и антиоксидантными механизмами [6].

Нарушение метаболизма и энергетического баланса — следствие окислительного стресса, вызывающего повреждение клеток и патологические изменения в тканях и органах. Прооксиданты инициируют окисление нуклеиновых кислот, перекисное окисление липидов (ПОЛ), а также повреждение клеточных мембран и белков. Дефицит антиоксидантной защиты и окислительный стресс являются ключевыми патогенетическими механизмами многих заболеваний, в том числе акушерско-гинекологического профиля [7]. Данные ряда исследований указывают на усиление процессов свободнорадикального окисления липидов и ослабление антиоксидантной системы крови при воспалительных заболеваниях женской репродуктивной системы [8-12].

Проблема разработки эффективных методов лечения самопроизвольного прерывания беременности остается актуальной. Несмотря на многочисленные исследования в этой области [13-15], поиск адекватных противовоспалительных стратегий продолжается. Альтернативой медикаментозной терапии, которая может вызывать побочные реакции (например, аллергию), являются методы физиотерапии, использующие воздействие магнитных полей, лазеров, озона и других физических факторов. Эти методы способствуют снижению воспалительной активности и положительно влияют на иммунную и антиоксидантную системы, а также на гемостаз [16, 17].

 

Целью нашего исследования явилось изучение состояния перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы защиты у пациенток после самопроизвольного выкидыша в первом триместре беременности при проведении профилактической противовоспалительной терапии.

 

Материалы и методы исследования. В исследовании принимали участие 146 пациенток фертильного возраста (26,8±2,8 лет) после самопроизвольного выкидыша, которым была проведена вакуум-аспирация содержимого полости матки ввиду обильных кровяных выделений. Обследованные были разделены на три группы в зависимости от проводимого метода профилактики воспалительных осложнений. К 1-й группе отнесены 48 женщин, которым назначали комплексную профилактику (антибактериальная и физиотерапия); 2-я группа включала 45 пациенток, которым, в связи с ранее имевшимися аллергиче­скими реакциями на антибиотики, назначали только физиотерапию; в 3-ю группу вошли 53 женщины, получившие только антибактериальную терапию, так как от проведения физиотерапии они отказались. В качестве антибактериальной терапии у пациенток без хламидийной инфекции использовали метронидазол 1,0г перорально в день прерывания беременности. Пациенткам, не обследованным на хламидийную инфекцию, назначали азитромицин 1,0г в сочетании с метронидазолом 1,0г перорально в день прерывания беременности. Антибактериальную терапию назначали с учетом клинических рекомендаций «Выкидыш (самопроизвольный аборт)», утвержденных Минздравом РФ в 2021-2022-2023гг. [18].

Первое обследование пациенток проводили на вторые сутки после самопроизвольного выкидыша и повторно – через 2 недели. Всем пациенткам при первом и повторном обследовании провели общеклиническое, лабораторное и инструментальное обследование. Помимо общепринятых методов лабораторного обследования, для углубленного изучения степени выраженности воспалительной реакции, вызванной прерыванием беременности, оценивали перекисное окисление липидов и антиоксидантную активность в сыворотке крови. В исследовании оценивались показатели перекисного окисления липидов (МДА и ДК) и активность ферментов антиоксидантной системы (каталаза и супероксиддисмутаза). Концентрация малонового диальдегида (МДА) определялась флуориметрическим методом по методике В.Б. Гаврилова и соавт. (1987) и выражалась в мкмоль/л. Для определения содержания ДК использовался спектрофотометр СФ-26; измерения проводились в метанол-гексановой липидной фракции (5:1) при длине волны 233 нм, результаты представлялись в единицах оптической плотности на миллиграмм общих липидов. Активность каталазы определялась спектрофотометрически по уменьшению концентрации перекиси водорода (ед./г Нв·мин), а активность супероксиддисмутазы — с помощью нитросинего тетразолия (ед./г Нв·мин). Забор крови осуществлялся из локтевой вены натощак в соответствии со стандартными протоколами.

Физиотерапия включала магнито-ИК-свето-лазерное воздействие на область малого таза. Использовали полупроводниковый лазерный аппарат отечественного производства «Милта-Ф», работающий в непрерывном и импульсном режимах, с излучением в ближнем инфракрасном диапазоне спектра. Магнито-ИК-свето-лазерную терапию начинали на вторые сутки после аспирации остатков плодного яйца, используя интравагинальное или трансабдоминальное воздействие на область проекции матки и придатков в течение 6-8 минут, на курс 6-8 сеансов [19].

Эффективность лечения оценивалась повторно через две недели после самопроизвольного аборта (второй визит) с использованием клинических, лабораторных и инструментальных методов. Статистическая обработка данных (среднее значение, стандартное отклонение, стандартная ошибка среднего) проводилась с помощью программы Epi Info версии 5.01b, для сравнения групп использовался t-критерий Стьюдента.

 

Результаты исследования и их обсуждение. Распределение женщин в зависимости от срока прерывания беременности достоверно не различалось по группам и составляло: до 6 недель – 40 (27,4%) пациенток; 6-9 недель – 106 (72,6%) обследованных. Группы больных не имели статистически значимых различий по своим клинико-анамнестическим характеристикам, состоянию гинекологического и соматического здоровья.

Все пациентки были обследованы при беременности, им проводили микробиологические исследования отделяемого из цервикального канала и соскоба со стенки влагалища. Результаты бактериоскопического исследования представлены на рис. 1.

Рис. 1. Результаты бактериоскопического исследования отделяемого половых путей у обследованных больных.

 

Как видно из данных рис. 1, в результате бактериоскопического исследования отделяемого половых путей статистически значимых различий между группами не было. Бациллярная флора обнаружена у 83 (56,8%) из 146 обследованных больных, причем в мазках присутствовали не только лактобактерии, но и другие виды палочек, включая E.coli. Повышенное количество лейкоцитов (более 30 в поле зрения) при осмотре мазков выявлено у 44 (30,1%) пациенток из 146 обследованных. Кокковая флора выявлена у 5 (10,4%), у 6 (13,3%) и у 6 (11,3%) пациенток первой, второй и третьей групп соответственно (р>0,05). Мицелий и споры гриба Candida обнаружены у 2 (4,1%) больных 1-й группы, у 2 (4,4%) – из 2-й группы и у 3 (5,7%) – из 3-й группы(р>0,05). Ключевые клетки обнаружены у 2 (4,1%), у 3 (6,7%) и у 2 (3,8%) пациенток первой, второй и третьей групп соответственно(р>0,05).

Патогенная флора (Neisseria gonorrhea, Chlamidya trahomatis, Trichomonas vaginalis, Mycoplasma genitalium) при бактериоскопическом, бактериологическом и ПЦР-исследовании обнаружены не были. При бактериологическом исследовании в биоматериале определялись условно-патогенные микроорганизмы (Enterobacteriaceae spp, Streptococcus spp, Staphylococcus spp, E.coli) у 15 (31,2%) пациенток 1-й группы, у 13 (28,9%) – во 2-й группе и у 14 (26,4%) – в 3-й группе (р>0,05).

            Для оценки воспалительной реакции и степени повреждения тканей определяли уровни перекисного окисления липидов (малоновый диальдегид и диеновые конъюгаты) и активность антиоксидантных ферментов (супероксиддисмутазы и каталазы) в сыворотке крови. Исследование проводилось дважды: на вторые сутки после самопроизвольного аборта и через две недели. В качестве контрольной группы выступали 30 здоровых женщин репродуктивного возраста (31,8 ± 1,5 лет), у которых были определены аналогичные показатели. Полученные результаты представлены в табл. 1.

Таблица 1.

Показатели системы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты у обследованных пациенток до начала противовоспалительного лечения

Показатель	Здоровые женщины (n=30)	Пациентки после самопроизвольного выкидыша (n=146)
Малоновый альдегид, мкмоль/л	0,92±0,03	1,24±0,08*
Диеновые коньюгаты, усл.ЕД	0,95±0,07	1,18±0,09*
Каталаза, усл.ЕД	0,24±0,08	0,17±0,5*
Супероксиддисмутаза, усл.ЕД	1,85±0,04	1,48±0,06*

 

*р<0,05 – различия показателей пациенток после выкидыша в сравнении со здоровыми женщинами

Установлено, что у женщин, перенесших самопроизвольный выкидыш, происходит накопление субстратов окисления процесса липопероксидации – малонового диальдегида – в 1,3 раза и диеновых коньюгатов – в 1,2 раза (р<0,05), по сравнению с практически здоровыми женщинами (табл. 1). При рассмотрении компонентов антиоксидантной системы у женщин после самопроизвольного выкидыша в первом триместре беременности, по сравнению со здоровыми женщинами, обнаружено снижение уровней каталазы (в 1,4 раза) и супероксиддисмутазы (в 1,25 раза) и эти изменения были статистически значимыми (р<0,05).

Далее мы сравнили результаты обследования пациенток после самопроизвольного выкидыша в зависимости от проведенного варианта противовоспалительной терапии – см. рис.2-5.

Рис. 2. Уровни малонового диальдегида (мкмоль/л) у обследованных больных после cамопроизвольного выкидыша при 1-м и 2-м визитах.

Рисунок 2 демонстрирует статистически значимое снижение уровня малонового диальдегида в сыворотке крови у всех пациенток после лечения (p<0,05), приближаясь к контрольным значениям. В группе 1 (антибактериальная терапия и физиотерапия — магнито-ИК-свето-лазерное воздействие и озонотерапия) снижение составило 20,5% (с 1,22±0,2 до 0,97±0,1 мкмоль/л), в группе 2 (только физиотерапия) — 21,9% (с 1,23±0,1 до 0,96±0,02 мкмоль/л), а в группе 3 (только антибактериальная терапия) — 20,97% (с 1,24±0,1 до 0,98±0,05 мкмоль/л). Статистически значимых различий в эффективности снижения уровня малонового диальдегида между группами обнаружено не было.

Рис. 3. Уровни диеновых коньюгатов (усл. ЕД) у обследованных больных после самопроизвольного выкидыша.

 

Проведенные исследования показали, что уровень диеновых коньюгатов (рис.3), который был повышен в первые сутки после выкидыша, по сравнению с таковым у здоровых женщин, на фоне проведенного профилактического противовоспалительного лечения статистически значимо снижался ко второму визиту у всех обследованных больных (р<0,05). Так, у пациенток 1-й группы, получивших комплексную терапию, уровень диеновых коньюгатов снизился на 20,2% (с 1,19±0,03 до 0,95±0,13 усл ЕД), во 2-й группе, получавших только физиотерапию – на 17,9% (с 1,17±0,03 до 0,96±0,13 усл ЕД), а в 3-й группе пациенток, получивших только антибактериальную терапию – на 16,9% (с 1,18±0,01 до 0,98±0,13 ЕД/мл) соответственно. Анализ показал, что у пациенток, получавших комплексную терапию, снижение уровня диеновых коньюгатов было более выраженным, по сравнению с пациентками, получавшими только физиотерапию или только антибактериальную терапию, однако, статистически значимых различий между тремя группами обследованных больных не выявлено.

Заслуживают внимания также данные уровней супероксиддисмутазы и каталазы, представленные на рис. 4 и 5. Данные показатели имели статистически значимые изменения (р<0,05) ко второму визиту, по сравнению с состоянием при первом визите, у всех пациенток.

Рис. 4. Уровни супероксиддисмутазы (усл. ЕД) в сыворотке крови у обследованных больных после самопроизвольного выкидыша.

 

Представленные данные на рис. 4 демонстрируют статистически значимое (р<0,05) увеличение уровня супероксиддисмутазы у пациенток всех обследованных групп, по сравнению с первым визитом, причем, более выраженным увеличение уровня фермента было в группе пациенток, получавших комплексную терапию: уровни супероксиддисмутазы увеличились на 21,1% (с 1,49±0,04 до 1,89±0,1 усл ЕД). Тогда как во 2-й группе увеличение супероксиддисмутазы составило 18,7% (с 1,48±0,04 до 1,82±0,05 усл ЕД), а в 3-й группе – 19,7% (с 1,47±0,2 до 1,83±0,3 усл ЕД).

            Результаты, представленные на рисунке 5, демонстрируют изменения уровня каталазы, маркера антиоксидантной защиты, после проведенного лечения. У всех пациенток наблюдалось статистически значимое увеличение активности каталазы (p<0,05), что свидетельствует о положительном влиянии терапии на антиоксидантный статус. Однако степень повышения активности каталазы существенно различалась между группами. В первой группе (комбинированная терапия: антибиотики и физиотерапия) наблюдалось наиболее выраженное увеличение активности каталазы — на 70,6% (от 0,17±0,1 до 0,29±0,1 усл. ед.). В группах, получавших только физиотерапию (группа 2) и только антибактериальную терапию (группа 3), рост активности каталазы был значительно меньше: 31,2% (0,16±0,1 до 0,21±0,2 усл. ед.) и 29,4% (0,17±0,1 до 0,22±0,3 усл. ед.) соответственно. Различия в приросте активности каталазы между первой группой и двумя другими группами статистически значимы (p<0,05).

Рис. 5. Уровни каталазы (усл. ЕД) в сыворотке крови у обследованных больных после самопроизвольного выкидыша.

 

Многочисленные исследования указывают на системный характер компенсаторных реакций, включающих повышение активности каталазы для снижения уровня активных форм кислорода при воспалении [8, 9, 10]. Таким образом, снижение активности каталазы в крови пациенток может сигнализировать о нарушении регуляции выработки активных форм кислорода и истощении адаптационных резервов организма. Сочетание повышенного уровня малонового диальдегида и сниженной активности каталазы рассматривается в ряде работ как неблагоприятный прогностический фактор при угрозе преждевременных родов [14, 15, 20].

В научной литературе широко представлены данные о тесной связи между хроническим воспалением и усилением ПОЛ. При различных хронических воспалительных заболеваниях, независимо от стадии процесса (ремиссия или обострение), наблюдается значительное повышение активности ПОЛ. Это приводит к накоплению в организме МДА, конечного продукта перекисного окисления липидов, и одновременному снижению эффективности антиоксидантной защиты [11, 12, 14]. Такая взаимосвязь подтверждается и в отношении хронического рецидивирующего неспецифического сальпингоофорита, где активация ПОЛ в сыворотке крови тесно коррелирует с выраженностью воспалительного процесса и симптомами интоксикации. Более того, исследования показывают прямую зависимость: чем интенсивнее протекают процессы пероксидации липидов, тем выше концентрация промежуточных продуктов ПОЛ и тем сильнее выражено снижение активности антиоксидантных ферментов [10, 11].

Результаты нашего исследования демонстрируют аналогичные изменения у пациенток, перенесших самопроизвольный выкидыш. Мы наблюдали усиление процессов перекисного окисления липидов, что подтверждается повышенным содержанием МДА и ДК [20]. Одновременно с этим было зафиксировано снижение активности ключевых ферментов антиоксидантной системы — каталазы и супероксиддисмутазы. Полученные данные позволяют предположить, что нарушения в системе свободнорадикального окисления липидов и дисбаланс между процессами образования активных форм кислорода и антиоксидантной защитой могут выступать в качестве важных предикторов развития самопроизвольного выкидыша. Дальнейшие исследования необходимы для более глубокого понимания роли окислительного стресса в патогенезе этого осложнения беременности и разработки эффективных профилактических и лечебных стратегий.

В первой группе пациенток, получавших комплексную профилактическую терапию (антибактериальная терапия и физиотерапия), воспалительные осложнения не были зафиксированы. Во второй группе (только физиотерапия) и третьей группе (только антибактериальная терапия) обострение хронического сальпингоофарита диагностировано соответственно у 2 (4,4%) и 3 (5,6%) пациенток (р>0,05). Несмотря на предположение о недостаточной эффективности физиотерапии без антибактериальной терапии, учитывая отсутствие у части пациенток подтвержденной патогенной микрофлоры и наличие аллергических реакций на антибиотики в анамнезе, во второй группе было принято решение ограничиться магнито-ИК-светолазерной терапией. Данный метод основан на синергическом действии постоянного магнитного поля, низкоинтенсивного импульсного лазерного и непрерывного светодиодного излучения инфракрасного (ИК) диапазона длин волн, что, согласно литературным данным, обеспечивает более выраженный терапевтический эффект по сравнению с монотерапией каждым из этих факторов [19].

Анализ результатов лечения показал, что из 45 пациенток, получавших физиотерапию (группа 2), воспалительный процесс развился лишь у 2 (4,4%), что свидетельствует о высокой эффективности магнито-ИК-светолазерной терапии. Данный показатель существенно ниже, чем в третьей группе (3 из 53 пациенток, 5,6%), где применялась только антибактериальная терапия. Таким образом, частота воспалительных осложнений во второй и третьей группах оказалась сопоставима. Это указывает на недостаточную эффективность монотерапии антибиотиками в профилактике воспалительных осложнений после самопроизвольного выкидыша. У двух пациенток второй группы с развившимся воспалительным процессом успешно проведена антибактериальная терапия с применением антигистаминных препаратов для предотвращения аллергических реакций. Аналогично, у трех пациенток третьей группы, несмотря на начальную антибактериальную терапию азитромицином и метронидазолом, потребовалось назначение цефалоспоринов третьего поколения в течение 7 дней для купирования воспалительного процесса.

Заключение. У пациенток после перенесенного выкидыша отмечаются признаки оксидативного стресса и нарушения состояния антиоксидантной системы. Нормализация состояния антиоксидантной системы происходит быстрее на фоне комплексной терапии, включающей антибактериальные препараты и магнито-ИК-свето-лазерную терапию. Проведение данной терапии значимо снижает частоту воспалительных осложнений. Проведенные нами исследования продемонстрировали хороший результат применения магнито-ИК-свето-лазерной терапии в сочетании с однократным назначением антибактериальных средств пациенткам после самопроизвольного выкидыша в первом триместре беременности для профилактики воспалительных осложнений, что позволяет рекомендовать данную методику для широкого клинического применения.

About the authors

Lyudmila A. Ozolinya

Federal State Autonomous Educational Institution of Higher Education «N.I. Pirogov Russian National Research Medical University» of the Ministry of Health of the Russian Federation

Email: ozolinya@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-2353-123X
SPIN-code: 9407-9014

MD, Dr. Sci. (Medicine), Professor

Russian Federation, 1 Ostrovityanova str., building 6, Moscow, 117513

Irina Viktorovna Bakhareva

Federal State Autonomous Educational Institution of Higher Education «N.I. Pirogov Russian National Research Medical University» of the Ministry of Health of the Russian Federation

Email: iribakhareva@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-3078-0744
SPIN-code: 3411-1570

MD, Professor of the Department of Obstetrics and Gynecology of the Institute of Surgery

1 Ostrovityanova str., building 6, Moscow, 117513;

Alexey V. Overko

Federal State Autonomous Educational Institution of Higher Education «N.I. Pirogov Russian National Research Medical University» of the Ministry of Health of the Russian Federation

Author for correspondence.
Email: leha.overko@yandex.ru
ORCID iD: 0000-0002-4629-9074
SPIN-code: 5519-2836

clinical graduate student

Russian Federation, 1 Ostrovityanova str., building 6, Moscow, 117513

Nailya I. Nasyrova

Federal State Autonomous Educational Institution of Higher Education «N.I. Pirogov Russian National Research Medical University» of the Ministry of Health of the Russian Federation; Central Clinical Hospital of Civil Aviation

Email: ni_nasyrova@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-0657-7655
SPIN-code: 9016-5566

MD, Cand. Sci. (Medicine), Head of the Department

Russian Federation, 1 Ostrovityanova str., building 6, Moscow, 117513; Ivankovskoe highway, 7, Moscow, 125367

Madina Z. Аrgun

Federal State Autonomous Educational Institution of Higher Education «N.I. Pirogov Russian National Research Medical University» of the Ministry of Health of the Russian Federation

Email: www2104@list.ru
ORCID iD: 0000-0003-4841-2496
SPIN-code: 5475-1763

Russian Federation, 1 Ostrovityanova str., building 6, Moscow, 117513

References

Supplementary files