Method of the sampling of biological material for the biological examination in the obstetric-gynecological practice

Full Text

Определение. Бактериологический метод исследования заключается в выделении чистой культуры микроорганизмов (чистая культура - это популяция, содержащая бактерии одного вида) и последующей идентификации выделенных бактерий: определении принадлежности микроорганизма к определенной систематической группе - виду, роду. Показания: вульвовагинальная инфекция в акушерстве и гинекологии; скрининговое обследование биоценоза влагалища при беременности. Цель: выявление патогенов при клинических формах бактериальной и грибковой инфекции, а также инфекции, вызванной простейшими; полноценная оценка биоценоза влагалища - системы взаимодействия микробных популяций с описанием качественной и количественной характеристики микробной составляющей; подбор рациональной антибактериальной терапии на основе спектра бактериальной чувствительности и резистентности; выявление при беременности бессимптомного бактериального носительства во влагалище ряда условно-патогенных микроорганизмов (например, Р-гемолитического стрептококка группы B). Информативность метода. Бактериологический метод исследования в диагностике целого ряда забо- В помощь практическому врачу леваний до настоящего времени остается «золотым стандартом», несмотря на появление множества конкурирующих методик и методов диагностики. Высочайшая информативность бактериологического метода обусловлена самой методологией его проведения: образец биологического материала, содержащий микроорганизмы, переносится на среду, идентичную нативному биотопу по минимальному набору питательных субстратов, а в процессе культивирования создаются благоприятные условия для дальнейшего роста и размножения микроорганизмов. Методика культивирования требует больших ресурсов, строгого соблюдения норм и стандартов, исследование занимает несколько дней и имеет высокую себестоимость. Вместе с тем данный метод помогает ответить на три главных вопроса клинической микробиологии и медицинской экологии, необходимых для диагностики бактериальных инфекций и оценки биоценозов: • качественный состав биотопа; • количественная характеристика каждого вида микроорганизмов; • антибиотикочувствительность и резистентность. В настоящее время не существует ни одного лабораторного метода, который в целом обладал бы большей информативностью по сравнению с бактериологическим. Вместе с тем необходимо отметить, что бактериологический метод не всегда является оптимальным: в ряде случаев альтернативные методы диагностики менее трудоемки и не менее информативны. Например, Neisseria gonorrhoeae не культивируется на обычных питательных средах, для ее роста необходима специфическая, т. н. «шоколадная» среда. Chlamydia trachomatis как внутриклеточный патоген требует для культивирования клеточную суспензию (клеточную культуру McCoy). Обнаружение Mycoplasma genitalium на данном этапе невозможно каким-либо альтернативным методом, кроме ПЦР-диагностики. Культуральное исследование на Trichomonas vaginalis, с одной стороны, является оптимальным (однако требует специфических сред), но с другой - весьма трудоемкое и длительное. Trichomonas vaginalis как представитель простейших также представляет ряд сложностей и при использовании стандартной световой микроскопии: при высушивании образца биологического материала, нанесенного на стекло, патоген теряет свои морфологические свойства, что затрудняет его обнаружение. Trichomonas vaginalis оптимально визуализируется в образцах нативного материала, смешанного с каплей физраствора, однако самым высокоинформативным методом диагностики трихомониаза является ПЦР-диагностика, обладающая самой высокой чувствительностью и специфичностью по отношению как к микроскопическому, так и к бактериологическому методу. Подготовка к исследованию. Материал у гинекологических пациенток нужно брать не в период менструального кровотечения. Оптимальной считается первая фаза менструального цикла. Необходимо предупредить пациентку о недопустимости использования накануне исследования спринцеваний, влагалищных душей, свечей и других внутривлагалищных систем. Распространенная ошибка - назначение антибактериального препарата с последующим бактериологическим исследованием. Бактериологическое исследование должно проводиться строго до начала антибактериальной терапии, контрольное бактериологическое исследование - через 7-10 дней после окончания курса. Несмотря на кажущуюся простоту и логичность данного правила, чрезвычайно распространены его нарушения. Также рекомендуется половой покой в течение 24-48 ч до взятия биоматериала. При необходимости проведения бактериологического исследования на Ch. trachomatis пациенты не должны принимать антибиотикотерапию в течение 1 месяца. Перед взятием биоматериала из уретры пациенткам рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в тече - ние 1,5-2 ч. При наличии обильных гнойных выделений из уретры отделяемое рекомендуется брать через 15-20 мин после мочеиспускания; при отсутствии выделений необходимо провести массаж уретры. При взятии образцов биологического материала для последующего бактериологического исследования медицинским персоналом должны использоваться пробирки с транспортными средами. Задачи транспортной среды - это сохранение морфологических свойств и жизнеспособности бактерий до пересадки их на питательные среды. Например, отграничение анаэробов и факультативных анаэробов от пагубного действия на них кислорода, содержащегося в воздухе. Пробирки без транспортной среды не рекомендуются к использованию в акушерско-гинекологической практике ввиду того, что основные представители влагалищного биотопа - микроаэрофилы (кисломолочные бактерии), кроме того, бактериальная инфекция может быть вызвана анаэробной флорой, например, пептострептококковой. А такое распространенное заболевание, как бактериальный вагиноз, характеризуется многократным увеличением именно анаэробной микрофлоры во влагалище. Перед вскрытием пакета с пробиркой для транспортировки биологического материала необходимо убедиться в его целостности и стерильности - на каждой пробирке указан срок годности, по истечении которого использовать расходные материалы не рекомендуется. Пакет с пробиркой распечатывают непосредственно перед проведением взятия биоматериала, например, когда шейка матки уже обнажена в зеркалах. Таким образом, условия репрезентативности проведенного бактериологического исследования можно сформулировать следующим образом: • Отсутствие у пациента какой-либо системной антибактериальной терапии (исключение составляют случаи неэффективности проводимой антибактериальной терапии). • Отсутствие какой-либо внутривлагалищной терапии и половых контактов в течение 24-48 ч. Guidelines for practitioners Рис. 1. Шейка матки выведена в зеркалах. Видны передняя, задняя губа шейки матки, щелевидный наружный зев. Рис. 3. Две запечатанные пробирки для бактериологического метода исследования с угольной транспортной средой (среда Эймса). Тонкий зонд используется для взятия отделяемого из уретры и цервикального канала, толстый - из влагалища. Рис. 4. Две запечатанные пробирки для бактериологического метода исследования с гелевой (слева) и угольной (справа) транспортными средами. Рис. 5. Пробирка с жидкой транспортной средой для последующего культивирования образца биологического материала на клеточной суспензии. Рис. 2. Удаление цервикальной слизи и влагалищных выделений с поверхности шейки матки стерильным марлевым тампоном. В помощь практическому врачу Рис. 6. Тонкий зонд с хлопковым тампоном. Рис. 7. Толстый зонд с хлопковым тампоном. Рис. 9. Положение руки врача при массаже уретры на сагиттальном разрезе. Рис. 8. Массаж уретры (уретрального киля влагалища) перед взятием биоматериала из уретры. Для взятия и доставки в лабораторию биологического материала используются пробирки с транспортной средой: угольной, средой Эймса (рис. 3, 4) или гелевой (рис. 4); для диагностики урогенитального хламидиоза посев на Clamydia trachomatis проводится на клеточной культуре McCoy, для чего в лаборатории выдается специальный мини-контейнер с жидкой транспортной средой (рис. 5). Для взятия свободного отделяемого из уретры и цервикального канала оптимально использовать ватный тампон на тонком металлическом зонде (рис. 6), из влагалища - ватный тампон на толстом зонде (рис. 7). При обследовании женщин материал из уретры берут с помощью одноразового стерильного зонда (например, исследование на урогенитальный хламидиоз) или тампона, обладающего повышенной адсорбцией (исследование условно-патогенной микрофлоры). Уретру массируют пальцем со стороны влагалища, прижимая ее со стороны лобковой кости - производится 2-3 массирующих движения к наружному отверстию уретры по уретральному килю влагалища (рис. 8, 9). Перед массажем уретры необходимо протереть наружное отверстие уретры стерильным марлевым тампоном. Зонд или тампон вводят на глубину 1,5-2 см и легким поскабливанием передней и боковых стенок уретры получают отделяемое (рис. 10). Немедленно после взятия зонд с тампоном опускают в транспортную среду. Из влагалища материал должен быть взят до проведения бимануального исследования. Зеркало перед манипуляцией можно смочить горячей водой, применение антисептиков и гелей для обработки зеркала противопоказано. Влагалищное отделяемое собирают стерильным ватным тампоном из сводов (рис. 11) и помещают в пробирку с транспортной средой. Взятие материала из цервикального канала производится только после того как шейку матки выводят при помощи зеркал. Когда шейка матки уже открыта Рис. 10. Получение соскоба из уретры. Рис. 11. Взятие свободного отделяемого влагалища. Мате риал берется из заднего, бокового и переднего свода. Рис. 12. Взятие отделяемого из цервикального канала для бактериологического метода исследования. Зонд вводится на глубину 1-2 см. в зеркалах, влагалищную часть ее протирают стерильным сухим ватным тампоном, как указывалось выше. Материал может быть взят тонким ватным тампоном, который вводят в цервикальный канал на 1-2 см и, осторожно поворачивая, вынимают, не прикасаясь к стенкам влагалища, и помещают в транспортную среду (рис. 12). Guidelines for practitioners Взятие материала у девочек производится со слизистой оболочки преддверия влагалища, иногда из заднего свода влагалища, путем введения зонда через гиме- нальные кольца. После взятия материала пробирки с транспортной средой могут храниться в холодильнике (не замораживать!) при температуре +4...60С в течение 48 ч. Оптимальной является доставка биоматериала в лабораторию в день взятия. Необходимо помнить, что информативность бактериологического исследования зависит от правильной техники взятия биоматериала, адекватной транспортировки и соблюдения правил культивирования микроорганизмов.

About the authors

Valery A. Kaptilnyy

I.M. Sechenov First Moscow State Medical University

Email: 1mgmu@mail.ru
MD, PhD, leading researcher of Research Department of Women’s Health of Research Center, Assistant of the Department of Obstetrics and Gynecology No1 of the I.M. Sechenov First Moscow State Medical University Moscow, 119991, Russian Federation

References

Supplementary files