Влияние пептидных линкеров на функциональные свойства гибридных структур c избирательным рh-зависимым связыванием с раковыми клетками

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Большинство современных методов терапии рака неспецифичны и оказывают побочное вредное воздействие на организм. В настоящее время разрабатываются методы нацеленной терапии рака, в частности с применением адресных пептидов, избирательно связывающихся с раковыми клетками. Цель настоящей работы – изучение перспектив применения пептида pHLIP, связывающегося с раковыми клетками при пониженном рН, в составе рекомбинантных белково-пептидных конструкций для диагностики и адресной терапии рака. Получены гибридные структуры на основе флуоресцентного белка EGFP и линкерной последовательности, соединяющей флуоресцентный белок с двумя различными вариантами pHLIP. Изучено влияние различных линкеров на рН-зависимое связывание конструкций с клетками, а также на эффективность синтеза хромофора EGFP в составе гибридной конструкции.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

А. Ю. Фролова

ФГБУН “Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова” РАН

Автор, ответственный за переписку.
Email: anastasiya_frolova_box@mail.ru
Россия, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

А. А. Пахомов

ФГБУН “Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова” РАН

Email: anastasiya_frolova_box@mail.ru
Россия, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

С. М. Деев

ФГБУН “Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова” РАН

Email: anastasiya_frolova_box@mail.ru
Россия, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

В. И. Мартынов

ФГБУН “Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова” РАН

Email: anastasiya_frolova_box@mail.ru
Россия, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

Список литературы

  1. Reshetnyak Y.K., Andreev O.A., Lehnert U., Engelman D.M. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. V. 103. P. 6460–6465. https://doi.org/10.1073/pnas.0601463103
  2. Svoronos A.A., Bahal R., Pereira M.C. Barrera F.N., Deacon J.C., Bosenberg M., DiMaio D., Glazer P.M., Engelman D.M. // Mol. Pharm. 2020. V. 17. P. 461– 471. https://doi.org/10.1021/acs.molpharmaceut.9b00883
  3. Frolova A.Yu., Pakhomov A.A., Kakuev D.L., Sungurova A.S., Deyev S.M., Martynov V.I. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2022. V. 612. P. 141–146. https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2022.04.112
  4. Adochite R.-C., Moshnikova A., Golijanin J., Andreev O.A., Katenka N.V., Reshetnyak Y.K. // Mol. Imaging Biol. 2016. V. 18. P. 686–696. https://doi.org/10.1007/s11307-016-0949-6
  5. Reshetnyak Y.K., Moshnikova A., Andreev O.A., Engelman D.M. // Front Bioeng. Biotechnol. 2020. V. 8. P. 335. https://doi.org/10.3389/fbioe.2020.00335
  6. Dharmaratne N.U., Kaplan A.R., Glazer P.M. // Cells. 2021. V. 10. P. 10030541. https://doi.org/10.3390/cells10030541
  7. Liu Y.-C., Wang Z.-X., Pan J.-Y., Wang L.-Q., Dai X.-Y., Wu K.-F., Ye X.-W., Xu X.-L. // Molecules. 2023. V. 28. P. 2175. https://doi.org/10.3390/molecules28052175
  8. Frolova A.Yu, Pakhomov A.A., Kakuev D.L., Sungurova A.S., Dremina A.A., Mamontova E.D., Deyev S.M., Martynov V.I. // J. Photochem. Photobiol. B Biol. 2023. V. 249. P. 112803. https://doi.org/10.1016/j.jphotobiol.2023.112803
  9. Weerakkody D., Moshnikova A., Thakur M.S., Moshnikova V., Daniels J., Engelman D.M., Andreev O.A., Reshetnyak Y.K. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2013. V. 110. P. 5834–5839. https://doi.org/10.1073/pnas.1303708110
  10. Pakhomov A.A., Frolova A.Yu., Tabakmakher V.M., Chugunov A.O., Efremov R.G., Martynov V.I. // J. Photochem. Photobiol. B Biol. 2020. V. 206. P. 111853. https://doi.org/10.1016/j.jphotobiol.2020.111853
  11. McRae S.R., Brown C.L., Bushell G.L. // Protein Expr. Purif. 2005. V. 41. P. 121–127. https://doi.org/10.1016/j.pep.2004.12.030

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Упрощенная схема (а) и пространственная модель (б) гибридных конструкций. Гексагистидиновая метка обозначена синим цветом, флуоресцентный белок – зеленым, линкер (linker) – лиловым, pHLIP – оранжевым.

Скачать (137KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Нормализованные спектры поглощения конструкций EGFP/pHLIP и EGFP.

Скачать (117KB)
Метаданные
4. Рис. 3. рН-зависимое связывание с клетками HeLa конструкций EGFP/pHLIPwt и EGFP/pHLIPvar3 с линкерами GS и IEGRCGS при различных значениях рН. Значения медиан интенсивности флуоресценции (MFI) нормированы относительно EGFP-IEGFCGS-pHLIPwt (наиболее эффективно связывающейся конструкции) с поправкой на степень созревания хромофора.

Скачать (131KB)
Метаданные
5. Рис. 4. pH-зависимое связывание EGFP/pHLIPwt с клетками HeLa, определенное с помощью конфокальной микроскопии. Слева направо: изображения в зеленом (EGFP, возбуждение 488 нм, излучение 500–550 нм) и синем (Hoechst 33258, возбуждение 405 нм, излучение 420–470 нм) каналах флуоресценции, проходящем свете и их наложение. Масштабный отрезок 20 мкм.

Скачать (471KB)
Метаданные
6. ПРИЛОЖЕНИЕ Рис. S1
Скачать (248KB)
Метаданные

© Российская академия наук, 2024