Сравнительный анализ поведения cy5-пиримидиновых нуклеотидов в реакции амплификации по типу катящегося кольца

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Синтезированы две пары Cy5-меченных трифосфатов dU и dC с аналогичными электронейтральными структурами флуорофора, различающиеся длиной углеводородного линкера между флуорофором и азотистым основанием. Проведен сравнительный анализ их субстратного поведения в варианте изотермической амплификации ДНК по типу катящегося кольца (RCA) с использованием ДНК-полимеразы Bst 3.0. Установлено, что нуклеотиды с длинным линкером между флуорофором и пиримидиновым основанием эффективнее встраиваются в растущую цепь ДНК, в то время как нуклеотиды с коротким линкером меньше ингибируют RCA. В каждой из пар dU и dC с аналогичными флуорофорами и линкерами большую плотность встраивания демонстрировали флуоресцентно-меченные производные уридина. Установлено, что при одновременном встраивании меченых dU и dC ингибирующий эффект не суммируется. Это дает основания для более внимательного изучения различных вариантов Cy5-dC с целью повышения чувствительности анализа при одновременном введении меченых dU и dC.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

С. А. Лапа

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Автор, ответственный за переписку.
Email: lapa@biochip.ru
Россия, 119991 Москва, ул. Вавилова, 32

П. А. Чиркова

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: lapa@biochip.ru
Россия, 119991 Москва, ул. Вавилова, 32

С. А. Суржиков

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: lapa@biochip.ru
Россия, 119991 Москва, ул. Вавилова, 32

В. Е. Кузнецова

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: lapa@biochip.ru
Россия, 119991 Москва, ул. Вавилова, 32

В. Е. Шершов

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: lapa@biochip.ru
Россия, 119991 Москва, ул. Вавилова, 32

А. В. Чудинов

Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

Email: lapa@biochip.ru
Россия, 119991 Москва, ул. Вавилова, 32

Список литературы

  1. Ali M.M., Li F., Zhang Z., Zhang K., Kang D.K., Ankrum J.A., Le X.C., Zhao W. // Chem. Soc. Rev. 2014. V. 43. P. 3324–3341. https://doi.org/10.1039/c3cs60439j
  2. Mori Y., Notomi T. // J. Infect. Chemother. 2009. V. 15. P. 62–69. https://doi.org/10.1007/s10156-009-0669-9
  3. Piepenburg O., Williams C.H., Stemple D.L., Armes N.A. // PLoS Biol. 2006. V. 4. P. e204. https://doi.org/10.1371/journal.pbio.0040204
  4. Чемисова О.С., Цырулина О.А., Трухачев А.Л., Носков А.К. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2022. Т. 99. C. 126–138. https://doi.org/10.36233/0372-9311-176
  5. Lapa S.A., Volkova O.S., Spitsyn M.A., Shershov V.E., Kuznetsova V.E., Guseinov T.O., Zasedatelev A.S., Chudinov A.V. // Russ. J. Bioorg. Chem. 2019. V. 45. P. 263–272. https://doi.org/10.1134/S0132342319040043
  6. Lapa S.A., Guseinov T.O., Pavlov A.S., Shershov V.E., Kuznetsova V.E., Zasedatelev A.S., Chudinov A.V. // Russ. J. Bioorg. Chem. 2020. V. 46. P. 557–562. https://doi.org/10.31857/S0132342320040168
  7. Spitsyn M.A., Kuznetsova V.E., Shershov V.E., Emelyanova М.А., Guseinov T.O., Lapa S.A., Nasedkina T.V., Zasedatelev A.S., Chudinov A.V. // Dyes Pigments. 2017. V. 147. P. 199–210. https://doi.org/10.1016/j.dyepig.2017.07.052
  8. Shershov V.E., Lapa S.A., Levashova A.I., Shishkin I.Yu., Shtylev G.F., Shekalova E.Yu., Vasiliskov V.A., Zasedatelev A.S., Kuznetsova V.E., Chudinov A.V. // Russ. J. Bioorg. Chem. 2023. V. 49. P. 1151–1158. https://doi.org/10.1134/S1068162023050242
  9. Lapa S.A., Volkova O.S., Kuznetsova V.E., Zasedatelev A.S., Chudinov A.V. // Mol. Biol. 2022. V. 56. P. 115–123. https://doi.org/10.31857/S0026898422010050
  10. Lapa S.A., Miftakhov R.A., Klochikhina E.S., Ammur Y.I., Blagodatskikh S.A., Shershov V.E., Zasedatelev A.S., Chudinov A.V. // Mol. Biol. 2021. V. 55. P. 828–838. https://doi.org/10.1134/S0026893321040063

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
2. Рис. 1. Флуорофор и линкер, связывающий его с 5-положением азотистого основания. В – азотистое основание. Остальные пояснения приведены в тексте.

Скачать (97KB)
3. Рис. 2. (а) – Кинетика амплификации RCA на примере dUL и dCL как при индивидуальном, так и при совместном применении; (б) – электрофореграмма результатов RCA в двухканальном режиме возбуждения/детекции (“зеленый” канал 530/585 нм и “красный” канал 630/690 нм). L – маркер длин двухцепочечной ДНК GeneRuler 50 bp (Thermo, Латвия).

Скачать (212KB)

© Российская академия наук, 2024